关于基因鉴定法检测五种动物药的原因,关于基因鉴定法检测五种动物药的相关知识。 动物类中药材一直缺少有效的鉴定方法。北京中医药大学中药学院选用了节肢类动物中常用的药材蜈蚣、全蝎、僵蚕、土鳖虫、蝉蜕为载体，在DNA的提取、PCR(聚合酶链式反应)扩增和18SrRNA基因测序的基础上，通过对酶切鉴别的初步研究，为中药生物鉴定法的构建提供了基本方法。
18SrRNA基因的酶切鉴别的基本步骤为：基因片段的扩增、酶切、电泳检测。研究人员利用常规提取方法结合改进后的提取方法，能从动物药中提取出完整的总DNA。用18SrRNA的通用引物扩增，测序得到蜈蚣554bp谱带，全蝎461bp谱带，僵蚕445bp谱带，土鳖虫470bp谱带，蝉蜕484bp谱带。研究筛选出了4个有鉴别意义的内切酶，并绘制了工程酶谱。研究者发现其中FokⅠ可以用于全蝎的专属性鉴定，TaiⅠ可以将蜈蚣、蝉蜕与其他3种药材分开，限制性内切酶EcoRⅡ可一次性地鉴别出5种动物药。
研究者认为，中药材的酶切鉴别特点是酶切位点的设计比较容易，可克服引物设计中因序列GC含量原因、碱基差异太小或差异位点相距较远等因素所带来的引物设计上的困难。在进行酶切分析时，单个碱基的差异，就有可能造成多个不同内切酶上的差异，为酶切鉴定奠定了基础。与PCR方法比较，在实验操作上，酶屑ň哂懈玫目芍馗葱浴CR法，除受引物特异性的影响外，还受模板浓度和质量、引物浓度、dNTP和Taq酶等试剂用量的影响，并且容易出现假阳性和假阴性结果，在单味药种以下鉴别水平上并非理想的方法。而酶切鉴定法除了酶本身的质量外，只要模板纯化达到酶切基本要求即可，反应条件比较固定，不需要任何专用设备即可完成，实验结果可信度高，误差较小。因此，该方法可用于中药的品质鉴定。 (文章出处：中国医药报88（总第2607期） )
18SrRNA基因的酶切鉴别的基本步骤为：基因片段的扩增、酶切、电泳检测。研究人员利用常规提取方法结合改进后的提取方法，能从动物药中提取出完整的总DNA。用18SrRNA的通用引物扩增，测序得到蜈蚣554bp谱带，全蝎461bp谱带，僵蚕445bp谱带，土鳖虫470bp谱带，蝉蜕484bp谱带。研究筛选出了4个有鉴别意义的内切酶，并绘制了工程酶谱。研究者发现其中FokⅠ可以用于全蝎的专属性鉴定，TaiⅠ可以将蜈蚣、蝉蜕与其他3种药材分开，限制性内切酶EcoRⅡ可一次性地鉴别出5种动物药。
研究者认为，中药材的酶切鉴别特点是酶切位点的设计比较容易，可克服引物设计中因序列GC含量原因、碱基差异太小或差异位点相距较远等因素所带来的引物设计上的困难。在进行酶切分析时，单个碱基的差异，就有可能造成多个不同内切酶上的差异，为酶切鉴定奠定了基础。与PCR方法比较，在实验操作上，酶屑ň哂懈玫目芍馗葱浴CR法，除受引物特异性的影响外，还受模板浓度和质量、引物浓度、dNTP和Taq酶等试剂用量的影响，并且容易出现假阳性和假阴性结果，在单味药种以下鉴别水平上并非理想的方法。而酶切鉴定法除了酶本身的质量外，只要模板纯化达到酶切基本要求即可，反应条件比较固定，不需要任何专用设备即可完成，实验结果可信度高，误差较小。因此，该方法可用于中药的品质鉴定。 (文章出处：中国医药报88（总第2607期） )