半边旗中二萜类化合物5F对凝血酶诱导兔血小板聚集的影响

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     作者：刘文覃燕梅梁念慈

    单位：

    刘文(广东医学院生物化学与分子生物学研究所，湛江 524023)；覃燕梅(广东医学院生物化学与分子生物学研究所，湛江 524023)；梁念慈(广东医学院生物化学与分子生物学研究所，湛江 524023)

    关键词：半边旗；二萜类；血小板聚集；凝血酶

    广东医学院学报000104 摘要：目的：研究半边旗中二萜类化合物5F(11α-羟基-15-氧-16-烯-对映贝壳杉烷-19酸)对凝血酶诱导兔血小板聚集的影响。方法：血小板悬液与5F孵育1 min，然后用凝血酶(500 U/L)作用5 min，用血液凝集仪记录血小板聚集情况。结果：半边旗中二萜类化合物5F对凝血酶诱导的兔血小板聚集有抑制作用。结论：半边旗中二萜类化合物5F具有抗血小板的作用。

    分类号：R0629.61

    文章编号：1005-4057(2000)01-0009-02

    Effect of a diterpenoid compound 5F isolated from Pteris semipinnata L on aggregation of rabbit platelets induced by thrombin

    Liu Wen,Qin Yanmei,Liang Nianci

    (Institute of Biochemistry and Molecular Biology,Guangdong Medical College,Zhanjiang 524023)

    Abstract：Objective：To study the effect of a diterpenoid compound 5F(ent-11α-hydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19-oic acid)isolated from Pteris semipinnata L(P^.s L) on aggregation of rabbit platelets induced by thrombin.Methods：Suspensions of platelets were incubated with 5 F for 1 min,and then with thrombin(500 U/L) for 5 min platelet aggregation was analysed by aggregometer.Results：5 F had inhibitory effect on platelet aggregation.Conclusion：A diterpenoid compound 5 F isolated from P^.s L has anti-platelet activity.

    Key words：Pteris semipinnata L;diterpenoid;platelet aggregation;thrombin▲

    半边旗(Pteris semipinnata L.PsL)为凤尾蕨科植物，广泛分布于我国南方，民间用于治疗菌痢，肝炎，肠炎，毒蛇咬伤等^[1]。本课题组在筛选抗肿瘤药的过程中发现，半边旗的有效成分有强的抗肿瘤作用^[2～5]。本文用比浊法研究半边旗中二萜类化合物 5 F(11α-羟基-15-氧-16-烯-对映贝壳杉烷-19酸，以下简称 5 F)对凝血酶诱导的兔血小板聚集的影响。结果报道如下。

    1 材料与方法

    1.1 动物

    家兔4只，♂♀兼用，体重(2.0±0.2)kg，由本院动物中心提供。

    1.2 药物和试剂

    半边旗中二萜类化合物 5 F(结构式如图1所示)由我所药物化学室分离纯化和鉴定。凝血酶、N-2-羟乙基哌嗪-N′-2-乙磺酸(Hepes)购自 Sigma公司。其余为国产分析纯或生化纯试剂。

    图1 5F的结构

    1.3 仪器

    TYXN-96Ⅰ多功能智能血液凝集仪，上海通用机电技术研究所。

    1.4 血小板聚集实验

    参照文献^[6]：兔血用塑料管收集和用ACD(86 mmol/L柠檬酸钠，111 mmol/L葡萄糖，53 mmol/L柠檬酸)0.15体积比抗凝，800 r/min离心 10 min，离心 2次，取上清，3000 r/min离心 15 min。沉淀中加 Tyrode-Hepes缓冲液(140 mmol/L氯化钠，5 mmol/L氯化钾，1 mmol/L氯化镁，10 mmol/L N-2-羟乙基哌嗪-N′-2-乙磺酸，10 mmol/L葡萄糖，pH 7.4)调节至血小板数为3×10¹¹～4×10¹¹/L。血小板聚集用血液凝集仪来测定。血小板悬液(0.2 mL)与药物孵育1 min，然后用凝血酶(500 U/L)作用5 min，记录聚集情况，然后计算各药物组的抑制率：抑制率＝(对照组聚集率-药物组聚集率)/对照组聚集率×100%。

    1.5 统计学处理

    实验数据的统计学处理采用F检验。

    3 结果

    半边旗中二萜类化合物 5 F对凝血酶诱导的兔血小板聚集有抑制作用，见表1。

    表1 不同浓度 5 F对凝血酶诱导兔血小板聚集的影响 5 F 浓度

    (c/μmol.L^-1)

    n

    血小板1分钟聚集率

    (

)%

    抑制率/%

    0

    4

    75.5±6^*

    80

    4

    42.3±4^**

    44

    160

    4

    44.8±24^**

    41

    320

    4

    13.1±13^***

    83

    500

    4

    1.91±3.3^***

    97

    *vs** P<0.05； *vs ***P<0.01

    3 讨论

    本文实验结果表明，半边旗中二萜类化合物5 F具有抑制凝血酶诱导血小板聚集的作用，随着5 F浓度的增大，对血小板聚集的抑制率也增加。5 F是一种含α，β-亚甲基环戊酮结构的对映贝壳杉烷类化合物，据文献报道^[7]，含此结构的化合物具有较高的反应活性，可经 Michael加成反应，与含巯基的酶结合，导致酶失活，从而显示这类化合物的细胞毒作用。化合物5 F的D环恰好具有这一特殊的结构，这提示，5F可能直接作用于血小板中某些酶分子本身，从而使酶失活，显示出其抗血小板的活性。5 F抗血小板作用的机制还有待于进一步的研究。■

    基金项目：广东省重点学科资金资助，(编号：9306)和广东医学院青年资金资助(编号：青9901)

    作者简介：刘文，男，1970年3月出生，学士，讲师

    参考文献：

    [1]丁恒山.中国药用孢子植物.上海：上海科技出版社，1982.104

    [2]Li JH，He Ch W，Liang NC，et al.Effect of the antitumor compounds isolated from Pteris semipinnata L on DNA topoisomerases and cell cycle of HL-60 cells.Acta Pharmacol Sin，1999，20(6)：541～545

    [3]李金华，梁念慈，莫丽儿，等.半边旗5种成分体外细胞毒活性比较及构效关系分析.药学学报，1998，33(9)：641～644

    [4]崔燎，张晓，梁念慈，等.一种新二萜类化合物的体外抗肿瘤研究.中国药理学通报，1998，14(1)：50～52

    [5]张晓，崔燎，田中信寿，等.半边旗有效成分及抗肿瘤活性研究.药物化学，1997，32(1)：37～38

    [6]Liu W，Song ZHJ，Liang NC，et al.Inhibitory effects of sodium quercetin monosulfate on pig platelet aggregation induced by thrombin.Acta Pharmacol Sin， 1999，20(7)：623～626

    [7]Hall IH Lee KH，Mar EC.Antitunor agents，a proposed mechanism for inhibition of cancer grwoth by tenulin and helenalin and related cyclopentenones.J Med Chem，1977，20(3)：333～337

    收稿日期：1999-09-10

    修稿日期：1999-12-15 (文章出处：广东医学院学报 2000年第1期第18卷)